【摘要】  通过检测慢性乙型肝炎患者血清一氧化氮（NO）水平，探讨NO在慢性乙型肝炎发病机理方面的作用，指导临床诊断治疗。方法:检测60例慢性乙型肝炎患者α-干扰素（INF-α）治疗前后（疗程3个月）、30例年龄匹配健康献血者（对照组）血清NO水平。结果:慢性乙型肝炎患者NO水平高于对照组（P＜0.05)，HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组NO水平高于HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组（P＜0.05)；慢性乙型肝炎患者经INF-α治疗后，血清NO水平显著降低（P＜0.05)。结论:NO与乙型肝炎病毒感染状态有关，可作为INF-α疗效考核指标之一。百佳论文网：www.k-t.net.cn www.100dxw.com     代写 代发医学论文，论文翻译修改。专业为医学工作者提供优秀的原创论文写作和期刊发表服务。 咨询电话：13377883993 电话：13517285882 联系QQ:1307958701 QQ：277459459 E-MAIL：100dxw@163.com【关键词】  慢性乙型肝炎;一氧化氮;α-干扰素 慢性乙型肝炎是严重危害我国人民健康的常见病。很多学者研究认为，NO参与其病理生理过程，是其中重要的作用因子[1]。有关NO在乙型肝炎病毒感染过程中的作用以及抗病毒药物治疗乙型病毒肝炎前后NO的表现尚少见报道。在此，我们试图通过分析HBV不同感染状态者血清中NO含量、抗病毒药物治疗慢性乙肝前后患者血清中NO含量，来探讨NO在HBV感染过程中的作用与HBV感染的临床转归之间的关系，为阐明抗乙肝病毒药物的治疗机理以及疗效评价提供有意义的材料。 1  对象与方法 1.1研究对象   INF-α治疗的慢性乙型肝炎患者60例，疗程3个月，HBV DNA均阳性。其中HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组30例为A组（男性16例，女性14例，年龄26.45±8.72岁,ALT轻度升高），HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组30例为B组（男性12例，女性18例，年龄30.12±5.43岁,ALT正常）。诊断均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎诊断标准。另随机选择30例年龄匹配的健康献血者（肝功能正常、乙肝病毒标志物检测均为阴性）为正常对照组。所有入选者均来自2004年11月至2005年8月包头医学院一、二附院门诊及住院患者。全部对象无亚硝酸盐类饮食史及药物治疗史。 1.2方法 1.2.1INF-α用法  300万单位肌注，每日1次，7d后，改为1周3次。 1.2.2样本采集 所有病例均于晨7时空腹抽取肘静脉血4mL，置于试管中离心（3000r/min，15min）分离血清，用冻存管置于-70℃冰箱中保存。 1.2.3NO检测方法 NO化学性质活泼，在体内代谢很快转为硝酸盐（NO-3）和亚硝酸盐（NO-2），血清硝酸盐（NO-3）和亚硝酸盐（NO-2）浓度之和才能准确代表体内NO的水平，血清（NO-3+NO-2）含量的测定采用硝酸还原酶法，该方法灵敏、准确、稳定。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，该产品为国内科研和临床部门认可的常用试剂盒，质量可靠。严格按其说明书操作，测定仪器使用上海精密仪器厂生产的721分光光度计。 1.3统计学方法 所有实验数据以均数±标准差(x±s)表示,显著性差异采用t检验。所有数据输入计算机,用SPSS10.0软件进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。 2结果    HBV不同感染状态者血清中NO浓度见表１。A、B组血清中NO浓度显著高于健康对照组（P＜0.05），A组高于B组（P＜0.05）。表1  HBV不同感染状态者血清中NO浓度比较（略） INF-α对血清NO浓度的影响见表2。经INF-α治疗后，A、B组血清NO浓度均明显降低(P＜0.05) ,A组NO浓度下降程度大于B组（P＜0.05）。表2INF-α治疗前后对血清NO浓度的变化（略） 3讨论    NO是具有自由基和第二信使双重特征的气态分子，所有肝细胞均可生成NO。一氧化氮合酶（NOS）为含铁单氧酶，是一氧化氮合成的唯一限速酶，根据NOS的细胞或组织来源及表达方式分为：（1）神经型NOS（neuronal NOS,nNOS）；（2）诱导型NOS（inducible NOS,iNOS）；（3）内皮型NOS（endothelial NOS,eNOS）。    本文结果显示慢性肝炎患者血清中NO浓度显著升高，而且随着HBV感染者传染性的增高，NO水平有逐渐升高的趋势，即随着HBV在体内的复制增高，感染者NO水平逐渐增高。原因可能是HBV感染肝细胞之后，机体免疫系统发生异常，导致TNFα、IL-1、IFNγ等细胞因子产生增加，和病毒基因组一道同时作用于iNOS启动子区AABS结合位点，促进AABS和C/EBPβ转录因子结合[2，3]， iNOS高水平转录，从而引起NO合成增加。此外，HBV X蛋白通过与iNOS启动子的核因子ΚB（NF-ΚB）位点结合导致iNOS合成增加，也可能是NO合成增加的原因。增加的NO负反馈抑制Th1细胞功能，增强Th2细胞功能，使产生TNFβ、IL-2、IFNγ量减少，免疫反应的效应降低，机体清除病毒能力减弱，导致病毒持续感染。因此可以把 NO视为了解慢性乙型肝炎患者病情的一个指标，与乙肝病毒感染者的临床转归可能有一定关系。     实验发现，干扰素可以下调HBV在转基因小鼠体内的复制[4]。 将HBV转基因小鼠与缺乏功能性iNOS表达的小鼠杂交，结果发现iNOS缺乏的小鼠可耐受细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对HBV复制的抑制作用，从而间接提示了NO在慢性肝炎细胞病理方面起重要作用。所以，慢性肝炎患者血清中NO浓度显著升高在介导抗肝炎病毒方面有其积极意义，但NO浓度持续处于高位水平，其细胞毒性作用突显出来。故适当降低体内NO水平对长期病毒复制活跃的慢性乙肝患者可能有益。    INF-α是目前临床上治疗病毒性肝炎的常用药物，其抗病毒作用的分子机理是：首先与靶细胞膜相应信号受体结合后，通过JAK-STAT信号转导途径，引起细胞内蛋白磷酸化，形成转录因子与细胞核内的DNA结合，参与基因表达和调控，诱导活性蛋白产生，产生抗病毒活性、抗增殖和凋亡作用[5]。INF诱导的其他机制包括：增加细胞强直、排空基础代谢物、抑制癌基因等[6]。同时INF-α能促进MHC-1类抗原的表达，增强CTL介导的细胞毒作用，提高宿主清除HBV的能力。Karupiah等[7]的实验证实在体外INF-γ抗病毒效应与iNOS活性密切相关。本文显示慢性乙型肝炎患者经INF-α治疗后血清NO浓度显著降低，大三阳患者NO浓度下降程度大于小三阳患者，可能与INF-α治疗抑制HBV复制以及CTL对HBV清除有关，iNOS在协助抗病毒过程中，耗竭L-精氨酸和NADPH，也是NO明显下降的原因。INF-α对于HBeAg阳性者治疗效果好，本实验结果显示大三阳患者NO浓度下降程度大于小三阳患者，表明血清NO浓度检测间接反映病毒复制状况，可作为INF-α考核疗效的指标之一。传染病论文